检测线粒体基因的表达水平需要提取总rna吗
①观察线粒体时,用的是健那绿这种活性染料,所以细胞是活的,观察叶绿体细胞也是活的,死亡的细胞叶绿体会失绿的,①正确;②观察DNA和RNA的分布的实验中,用盐酸水解时细胞已经死亡,②错误;③检测生物组织中的蛋白质需要制备组织样液,细胞破裂,③错误;④探究细胞的吸水和失水,细胞要通过渗透作用吸水或失水,细胞必须保持活性,④正确;⑤探究酵母菌的呼吸方式实验,死亡的细胞是不会进行呼吸作用的,所以细胞必须保持活性,⑤正确.由以上分析可知正确的有①④⑤.故选:B.
怎样提取细胞核内的RNA
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
线粒体dna不用试剂盒怎么提取
提取线粒体dna方法:(仅供参考)
(1)Triton法: 取10的7次方细胞沉淀,悬浮于5ml的Triton溶解液中.温和振荡片刻后,室温下放置10min.反应完毕的溶液以8000r/min离心1min,上清即为mtDNA.
(2)碱变性法: 取107细胞沉淀,依次加入溶液A(4℃)150Λl,冰浴中将沉淀吹打分散后加入300Λl溶液B(常温),将Eppendrof管缓慢颠倒10次,冰浴裂解变性6~8min,再加入225Λl溶液C(0~4℃),轻柔混匀,冰浴复性20~25min.反应完毕的溶液以10000rmin离心6min,4℃,取上清.1.3.3改进高盐沉淀法[3] 取107细胞沉淀,加入溶液5500Λl,混匀,2000r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液5500Λl,混匀,3500r/min,10min,弃上清.沉淀加溶液950Λl,混匀后加入20mg/ml蛋白酶K50Λl和10%SDS120Λl,快速混匀.40℃过夜或50℃4h.加入300Λl饱和醋酸钠,混匀,轻摇15S.15000r/min,4℃,15min,取上清Eppendrof管中.取上清后步骤相同.上清中加入等体积酚∶氯仿∶异醇(25∶24∶1),温和振荡8min,10000r/min,10min4℃,取上层水相重复该过程抽提一次,轻取上层水相.加入2倍体积冰乙醇或等体积异丙醇,冰浴30min,15000r/min,10min,弃上清.用70%冰乙醇漂洗沉淀,15000rmin,2min,彻底去上清.沉淀于空气中自然部分干燥25min,加入适量RTE液溶解.贮于4℃